Nuestro  consejo técnico anterior  hablaba de los reactivos de sililación que pueden usarse para derivatizar una variedad de analitos polares, ácidos y básicos para mejorar la volatilidad y la forma de los picos durante la cromatografía de gases. Los reactivos de sililación no son el único juego en la ciudad cuando se derivan grupos amino y ácidos carboxílicos para el análisis de GC. Los haluros primarios y los cloroformiatos son dos reactivos que son comunes al derivatizar analitos para HPLC y pueden adaptarse fácilmente a los flujos de trabajo de preparación de muestras para GC.

Reactivos derivatizantes con tampón fosfato

Los reactivos de cloroformiato se dirigen a las aminas primarias y secundarias para generar carbamatos, para los cuales un reactivo de cloroformiato común para GC es el cloroformiato de propilo. Prepare el reactivo de cloroformiato en un disolvente aprótico miscible con agua, como acetonitrilo, y prepare por separado un tampón de borato de sodio con pH 9,0 -10,0. El borato de sodio es el tampón preferido para minimizar las reacciones secundarias del reactivo de cloroformiato, pero pueden usarse otros tampones de pH básicos.

La reacción generalmente requiere volúmenes iguales de solución tampón y de reactivo de cloroformiato, los cuales son lo suficientemente pequeños como para llenar la mitad de un vial de centelleo cuando se combinan. Agite el vial durante aproximadamente 1 a 5 minutos a temperatura ambiente para completar la reacción. El truco es la limpieza, para lo cual se puede aplicar hexano directamente a la mezcla de reacción acuosa para realizar una extracción líquido-líquido. El hexano se separará como la capa superior que contendrá los analitos derivatizados y que es fácilmente accesible para una pipeta.

Proporción de tampón de propil cloroformiato y borato con reactivos de derivatización.

Pueden usarse haluros primarios para derivatizar ácidos carboxílicos en ésteres. Dos reactivos comunes son 2,4′-dibromoacetofenona (DBAP) y bromuro de pentafluorobenzo (PFB-Br). La ventaja de PFB-Br es la selectividad y sensibilidad de los analitos derivatizados hacia los detectores de ECD, mientras que DBAP también permite la detección de ECD. Las condiciones de reacción son comparables a las condiciones del cloroformiato anteriores, incluida una extracción líquido-líquido para capturar el analito derivatizado.

El reactivo de haluro primario se disuelve en un solvente aprótico que es miscible en agua. El analito de carboxilato diana se puede tratar con un tampón fosfato neutro, al que luego se añade la solución de reactivo derivatizante. Si el disolvente reactivo es miscible en agua, entonces la reacción puede continuar con o sin un catalizador de alquilamino adicional, y el éster resultante puede extraerse luego en hexano. Una consideración es que la derivatización puede llevar al menos una hora y puede requerir temperaturas elevadas.

Hay muchas variedades de los protocolos generales compartidos anteriormente, particularmente cuando se trabaja con PFB-Br. El reactivo derivatizante se puede disolver intencionalmente en un disolvente inmiscible en agua, dependiendo de las consideraciones más amplias de la propia muestra. La consideración importante es que elija el protocolo que se alinee con las características químicas más amplias de su analito y la matriz de la muestra con la que comienza su experimento.